分析型流式細(xì)胞儀檢測(cè)原理

將待測(cè)樣品制成單細(xì)胞懸液，在鞘液的包裹下進(jìn)入流式細(xì)胞儀內(nèi)的檢測(cè)區(qū)域，細(xì)胞在激光的照射下會(huì)發(fā)生散射和折射，產(chǎn)生的散射光信號(hào)和熒光信號(hào)由不同的通道接收。其中前向角散射光（FSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞直徑成正相關(guān)，可以理解為細(xì)胞直徑越大，F(xiàn)SC越強(qiáng)，細(xì)胞直徑越小，F(xiàn)SC越弱。所以可以利用細(xì)胞的FSC值初步比較細(xì)胞的大小，利用FSC值對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分群和分類。  

側(cè)向角散射光（SSC）的強(qiáng)度與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)復(fù)雜程度成正相關(guān)（與細(xì)胞中所含的細(xì)胞器、細(xì)胞核等的數(shù)量成正比），可以理解為細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越復(fù)雜，SSC越強(qiáng)；細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)越簡(jiǎn)單，SSC越弱。所以可以利用細(xì)胞的SSC值初步比較細(xì)胞的顆粒度，利用SSC值對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分群和分類。

當(dāng)細(xì)胞通過(guò)激光束時(shí)，檢測(cè)器會(huì)檢測(cè)到細(xì)胞或顆粒的散射光，放置在前面的檢測(cè)器檢測(cè)FSC值，而放置在側(cè)面的多個(gè)檢測(cè)器檢測(cè)SSC值。通過(guò)綜合分析前向散射FSC和側(cè)向散射SSC的數(shù)據(jù)，便能根據(jù)細(xì)胞大小、形狀和復(fù)雜度將其進(jìn)行分群分類。由于樣品細(xì)胞不需要標(biāo)記任何熒光化合物偶聯(lián)抗體，直接上樣分析得到FSC值和SSC值，其值代表細(xì)胞的大小和顆粒度兩個(gè)物理特征，所以FSC-SSC散點(diǎn)圖又稱為 “物理圖"。

分選型流式細(xì)胞儀檢測(cè)原理

當(dāng)細(xì)胞懸液放入樣品管中，被高壓壓入流動(dòng)室內(nèi)。流動(dòng)室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的包裹和推動(dòng)下，細(xì)胞被排成單列，以一定速度從流動(dòng)室噴口噴出。在流動(dòng)室的噴口上配有一個(gè)超高頻的壓電晶體，充電后振動(dòng)，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴，待測(cè)細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正、負(fù)不同的電荷，當(dāng)液滴流經(jīng)過(guò)帶有幾千伏的偏轉(zhuǎn)板時(shí)，在高壓電場(chǎng)的作用下偏轉(zhuǎn)落入各自的收集容器中，沒(méi)有充電的液滴落入中間的廢液容器，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離。流式細(xì)胞儀除了根據(jù)FSC和SCC散射度或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量，酶活性，特異抗原) 散射度差異來(lái)分離細(xì)胞外，更多的采用細(xì)胞表面抗原標(biāo)記的熒光強(qiáng)度差異來(lái)分離細(xì)胞。每種細(xì)胞表面具有du te的抗原，當(dāng)形態(tài)學(xué)檢測(cè)難以區(qū)別時(shí)，免疫表型參數(shù)對(duì)細(xì)胞分選有決定性作用。

流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果

熒光信號(hào)和散射光信號(hào)通過(guò)波長(zhǎng)選擇的濾光片，由相應(yīng)的光電管和電子檢測(cè)器接收并轉(zhuǎn)換成電信號(hào)，經(jīng)放大器放大后送入計(jì)算機(jī)并進(jìn)行分析顯示和結(jié)果輸出，測(cè)定的結(jié)果常用流式直方圖、流式散點(diǎn)圖、流式密度圖和流式等高線圖來(lái)表示。

流式細(xì)胞術(shù)樣本類型

流式細(xì)胞儀可檢測(cè)多種樣本：外周血、骨髓、細(xì)胞穿刺液、洗脫液、實(shí)體組織、培養(yǎng)細(xì)胞、微生物。

流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用

1.流式細(xì)胞術(shù)可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞表面以及胞內(nèi)的各種標(biāo)志，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分群鑒定以及各種蛋白表達(dá)量高低的比較。

2.通過(guò)標(biāo)記Ki67、BCL-2、caspases等增殖及凋亡相關(guān)基因，流式細(xì)胞術(shù)可用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞的增殖以及凋亡。

3.流式細(xì)胞術(shù)可用來(lái)分析細(xì)胞周期。細(xì)胞核DNA含量隨著細(xì)胞增殖周期時(shí)相的不同而發(fā)生變化，用DNA染料進(jìn)行染色，DNA含量多，熒光信號(hào)強(qiáng)，DNA含量少，熒光強(qiáng)度低。

4.在腫瘤學(xué)研究中尤其常用，流式細(xì)胞術(shù)可以用于判斷藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞影響、腫瘤的生長(zhǎng)速度等。