產品名稱：血漿cfDNA提取試劑盒（離心柱）

產品貨號：TD476-50 (50 次反應)

產品亮點：

可從 10ml 以內的血清/血漿，1m 以內的羊水或腦脊液中提取到高純度的游離 DNA。

獲得的 DNA產量高、純度好，可以直接用于酶切、PCR、高通量測序等分子生物學實驗。

注意事項：

環境溫度低時 SP消化液或者 SPDNA洗滌液1可能出現析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾分鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

蛋白酶K及其保存液可常溫運輸。

產品特性：

樣品種類: 血清，血漿，羊水和腦脊液（CSF）?

處理的體積量: 血漿- 單次離心：最多 3ml  兩次離心：最多 10ml

血清- 最多 10ml

羊水- 最多 1ml

腦脊液- 最多 1ml ?

DNA 純度: 獲得的 DNA 產量高、純度好， 可以直接用于 qPCR 高通量測序等各種分子生物學實驗。?

DNA 回收情況: 回收的 DNA≥100bp(本試劑盒針對無細胞的 DNA 提取經過優化)，總量根據不同的樣品個體差異可能會比較大。一般從血清或血漿中提取到的 DNA 濃度在 1-100 ng/ml。?

需要的儀器設備:水浴鍋或者金屬浴（55℃）。微型離心機，負壓多聯器或立式離心機

試劑制備：

1.使用前需要添加6.5ml蛋白酶K保存液到蛋白酶K(125mg)里。蛋白酶K的終濃度約為20mg/ml。混勻之后放在-20℃保存

2.使用前需要添加48 ml 95-100%的無水乙醇到12ml的SP DNA洗滌液2中。(B)蛋白消化

操作步驟：

從≤5ml的樣品中提取游離 DNA

除非特殊說明，一般常溫(15-30℃)進行以下操作步驟，以下步驟以 200u血漿，血清或其他生物液體樣品為例，當樣品量發生變化的時候，只需要等比例的調整 SP 消化液，蛋白酶K和 SP DNA 結合液的用量就可以。

1.添加 50u 的 SP 消化液到每 200u 的樣品中，混勻。(根據表格1按照一定比例添加試劑)2.添加 20u 的蛋白酶 K到每 200m 的樣品中，混勻。(根據表格1按照一定比例添加試劑)3.在 55℃下孵育 30 分鐘。

4.添加 2 倍體積的 SP DNA 結合液到步驟 3中消化的樣品中，混勻。

以下步驟可以通過真空負壓的方式也可以通過離心的方式進行操作(負壓設備所用真空多連器推薦美國 ZYMORESEARCH 公司)

負壓操作步驟:

5.確認3號柱S套裝(連接15ml套筒)連接緊密后放置在負壓多連器上。

6.倒入上述步驟4的混合液(含 SP DNA 結合液)，打開真空開關使液體通過柱子。確保液體通過柱子并且沒有殘留液體下流后，關閉真空泵并拔掉連接的 15ml套筒。

以下步驟 7-8 也可以用臺式離心機操作。

7.關掉真空開關，倒入 400uSP DNA洗滌液1到柱子上，打開真空開關，讓液體通過3號柱S

8.關掉真空開關，加入 700μSP DNA 洗滌液 2(請先檢査是否已加入無水乙醇!)到3號柱S內，打開真空開關讓液體通過柱子。

9.重復第 8步。

10.將3號柱S套在 2ml收集管上，然后放置在臺式離心機上全速離心2分鐘以去除殘留乙醇。

11.將3號柱S套在一個干凈的 1.5m離心管內，添加 50u的 DNA洗脫液到柱基質上。(洗脫液事先在 65-70℃水浴中預熱，洗脫效果更好)，室溫放置3分鐘，在>10,000xg條件下離心1分鐘來洗脫 DNA。歡迎訂購：

天津益元利康生物科技有限公司現貨供應簡石生物血漿cfDNA提取試劑盒（離心柱）（TD476），歡迎選購！