你知道什么是二抗嗎？讓我們一起來(lái)看看吧！

一、二抗的定義

第二抗體（二抗）是在其它宿主體內(nèi)制備的能與一抗或一抗片段結(jié)合的抗體，即抗體的抗體，其主要作用是檢測(cè)抗體的存在，放大一抗的信號(hào)。二抗是利用一抗是大分子的蛋白質(zhì)具有抗原性的性質(zhì)，去免疫異種動(dòng)物，由異種動(dòng)物的免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的針對(duì)于此抗體的免疫球蛋白。二抗針對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體（如IgG、IgM或IgA等）均具有反應(yīng)性。

二、二抗的設(shè)計(jì)原理

根據(jù)同一種來(lái)源的同種亞型抗體的恒定區(qū)是保守的，以此充當(dāng)抗原刺激機(jī)體產(chǎn)生的抗體可以識(shí)別同種亞型一抗，根據(jù)這一原理設(shè)計(jì)制備二抗。

抗IgG (H+L)恒定區(qū)：靶向一抗的重鏈和輕鏈恒定區(qū)。這些抗體也會(huì)與其他類(lèi)(如IgE、IgD等)發(fā)生反應(yīng)，因?yàn)檫@些類(lèi)之間共享輕鏈。更廣泛的表位識(shí)別(H+L)二抗使其適用于大多數(shù)需要二抗的免疫分析。

抗IgG Fc片段或重鏈恒定區(qū)：與抗IgG (H+L)二抗不同，靶向一抗Fc區(qū)域或重鏈的二抗具有類(lèi)特異性，不會(huì)與其他類(lèi)免疫球蛋白發(fā)生反應(yīng)，因?yàn)槊恳环N抗體的重鏈或者Fc片段是不一樣的（見(jiàn)圖2）。如果打算在Ip后進(jìn)行Western blotting分析，建議使用重鏈特異性二抗來(lái)檢測(cè)位于25kDa分子量附近的目標(biāo)蛋白，以避免輕鏈的干擾。此外，F(xiàn)ab片段抗Fc二抗可用于一抗在多次標(biāo)記實(shí)驗(yàn)孵育前預(yù)標(biāo)記。

抗IgG輕鏈恒定區(qū):靶向一抗的輕鏈(kappa或lambda)。這些抗體不與一抗重鏈反應(yīng)，但識(shí)別其他免疫球蛋白類(lèi)的共享輕鏈。例如，山羊抗人IgG Kappa輕鏈二抗不僅能識(shí)別IgG亞類(lèi)，還能識(shí)別IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈。在Ip后進(jìn)行Western blotting分析時(shí)，建議使用輕鏈特異性二抗來(lái)檢測(cè)來(lái)檢測(cè)位于55kDa分子量附近的目標(biāo)蛋白，以避免重鏈的干擾。

抗IgG F(ab’)2片段恒定區(qū)：靶向于一抗的F(ab’)2片段區(qū)。由于識(shí)別了F(ab)區(qū)域的共享輕鏈，它們會(huì)與IgA、IgD、IgE、IgM等輕鏈發(fā)生反應(yīng)。

三、二抗的優(yōu)勢(shì)

與僅使用標(biāo)記一抗直接檢測(cè)目標(biāo)物相比，使用二抗識(shí)別一抗間接檢測(cè)目標(biāo)物具備多種優(yōu)勢(shì)。

通用性：二抗針對(duì)某一特定物種（如小鼠）的所有抗體均具有特異性，因而使用標(biāo)記的二抗可以免去對(duì)每一個(gè)一抗進(jìn)行標(biāo)記，大大節(jié)省了時(shí)間和費(fèi)用。

放大信號(hào)：一個(gè)一抗分子可以同時(shí)結(jié)合幾個(gè)標(biāo)記二抗分子，從而增強(qiáng)信號(hào)并提高檢測(cè)靈敏度。在有些檢測(cè)中，可使用生物素化的二抗和鏈霉親和素偶聯(lián)的標(biāo)記分子來(lái)進(jìn)一步增強(qiáng)信號(hào)。

允許進(jìn)行多重檢測(cè)實(shí)驗(yàn)：由于二抗具有物種特異性，因此可以將實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)為使用源自不同物種的一抗來(lái)檢測(cè)多種目標(biāo)物。使用與具有不同波長(zhǎng)發(fā)射光的熒光染料標(biāo)記的二抗來(lái)檢測(cè)不同的目標(biāo)物。

保留互補(bǔ)位：一抗與標(biāo)記分子的偶聯(lián)，有可能會(huì)影響其抗原結(jié)合位點(diǎn)，也稱(chēng)為互補(bǔ)位。這將降低一抗與其靶抗原結(jié)合的能力。使用標(biāo)記二抗后，可以在檢測(cè)中使用未偶聯(lián)的一抗而避免影響其與抗原的結(jié)合。

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