如何提高電轉(zhuǎn)效率？

更新時(shí)間：2023-09-14

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電轉(zhuǎn)，也稱電穿孔法，是通過脈沖電流在細(xì)胞膜上打孔，將外源分子（DNA、RNA 、mRNA等）導(dǎo)入真核細(xì)胞內(nèi)，來改變細(xì)胞的特性，從而達(dá)到改造細(xì)胞的目的，是實(shí)現(xiàn)細(xì)胞基因功能和蛋白質(zhì)表達(dá)研究的重要工具。那么該如何提高電轉(zhuǎn)效率呢？讓我們一起來看看吧！

一、細(xì)胞收集時(shí)：

1)在消化貼壁細(xì)胞時(shí)，一定要注意終止胰酶反應(yīng)，防止過度消化；最好使用專業(yè)的胰酶中和劑；

2)在進(jìn)行細(xì)胞離心時(shí)，使用低轉(zhuǎn)速長(zhǎng)時(shí)間離心，提升細(xì)胞的存活率；

3)選擇合適狀態(tài)的細(xì)胞，一般原代細(xì)胞可以傳1-2次后使用；盡量挑選迭代次數(shù)少的細(xì)胞，如果是凍存細(xì)胞，建議復(fù)蘇1-2h后使用；

4)選擇對(duì)數(shù)增長(zhǎng)期的細(xì)胞；

5)做好支原體清除。

二、試劑添加：

1）電轉(zhuǎn)試劑的添加只需室溫操作即可；

2）細(xì)胞在試劑中停留不超20min，混合好盡快開始實(shí)驗(yàn)；

3）轉(zhuǎn)染的底物占比不能大于總體積的10%，比如轉(zhuǎn)染體系100ul，底物最多添加10ul；

4）在消化的細(xì)胞進(jìn)行配置時(shí)，一定要離心并完quan去除殘留培養(yǎng)基；

5）在加入到電極杯中時(shí)，要避免產(chǎn)生氣泡，從而影響電脈沖；